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禽腺病毒感染的诊断与防控

禽腺病毒(avian adenoviruses, AAV) 感染引起临床疾病的最早报道见于1950年。当时从出现呼吸系统症状的鹌鹑中分离了AAV。自从那时起, 各种家禽以及野生禽类陆续出现了关于AAV感染的各种报道。AAV感染可以引起多种疾病, 其中比较常见的有两种, 分别是包涵体肝炎 (Inclusion body hepatitis, IBH) 和产蛋减少综合征 (Egg drop syndrome, EDS) 。
  包涵体肝炎和产蛋减少综合症是禽腺病毒感染引起的两种重要疾病。本文对这两种疾病的病原学、流行病学、临床症状、病理变化、诊断以及防控进行了综述。
  1 病原学
  禽腺病毒是一种无囊膜的DNA病毒。腺病毒对多种消毒剂、高温以及pH变化有一定的耐受性。碘伏和醛类消毒剂如果接触病毒时间较长, 对病毒有一定消毒作用。
  过去, 根据宿主范围以及抗体反应性的不同, 腺病毒科 (Adenoviridae) 可以分为两个属, 其中从哺乳动物分离到的病毒为哺乳动物腺病毒属 (Mastadenovirus) , 从禽类分离到的病毒为禽腺病毒属 (Aviadenovirus) 。最近根据国际病毒分类委员会 (ICTV) 的最新分类, 病毒被归为四个不同的属。其中哺乳动物腺病毒属的病毒是来源于人、猴、牛、猪、马、鼠、绵羊和山羊的腺病毒。禽腺病毒属起初被称为禽腺病毒-1型, 包括了欧洲地区已确认的12种禽腺病毒 (Fowl adenovirus, FAV) 血清型中的11种。唾液腺病毒属 (Siadenovirus) 起初被称为禽腺病毒-2型, 主要包括火鸡出血性肠炎病毒 (Haemorrhagic enteritis virus of turkeys, HEV) 、雉鸡大理石脾病 (Marble spleen disease, MSDV) 、鸡脾肿大病毒 (Avian adenovirus splenomegaly Virus, AASV) 等。胸腺病毒属 (Atadenovirus) 原来称禽腺病毒-3型, 包括产蛋减少综合征病毒 (Egg drop syndrome virus, EDSV) 等。
  2 包涵体肝炎/心包积液综合征 (IBH/HPS)
  包涵体肝炎于1963年在美国首次报道。之后, 世界各地很多国家都报道了此病。IBH/HPS在肉鸡以及蛋鸡中均可发生。IBH可以通过水平和垂直两种方式传播。垂直传播被认为是FAV从母代传给子代的重要特征。感染病毒的种鸡向子代排毒的时间可达3~6周, 直到子代鸡产生免疫力为止。病毒还可以长期潜伏在SPF鸡群中。鸡与鸡之间的水平传播主要通过污染病毒的粪便进行粪口传播。
  1日龄的SPF鸡人工感染分别从巴基斯坦和厄瓜多尔分离到的FAV-4毒株后, 在第6~11天期间出现了精神沉郁、活动减少等症状, 但在第11天之后没有其他新的症状出现。死亡现象从攻毒后的第7天开始出现, 共持续了5d。病毒感染3d以上, 从小鸡肝脏中很难分离到病毒。
  日常生产实践中, 包涵体肝炎 (IBH) 的主要特征是4日龄至6周龄的鸡突然出现死亡率增加。死亡率一般在2%~40%之间。但是因病毒的致病力、鸡群的免疫状况以及继发感染的不同, 有时会出现高达80%的死亡率报道。死亡率通常在3~4d内达到最高峰, 在9~14d后结束。临床症状主要有嗜睡、羽毛竖起、食欲不正、出现黄色粘性粪便等。病毒感染也会引起饲料转化率降低、增重减少。
  肉眼可见的大体病变包括肝扩张、发白、易碎, 肝有时也会出现坏死灶。腿以及胸部肌肉会出现带有瘀斑的出血。心脏因为有心包积液而显得很松弛。发生心包积水综合征 (HPS) 时, 心包会有稻草色的积液渗出。此外, 有时也能够观察到肾炎、脾肿大以及胸腺萎缩等病变。显微病变包括有坏死灶、有些肝脏有嗜碱性的核包涵体。心脏可以观察到多灶性坏死以及出血。脾脏、胸腺以及法氏囊的淋巴衰竭现象也能够观察到肝的病变主要有出现小灶性凝固性坏死, 单核细胞浸润, 肝细胞中出现嗜碱性包涵体。
  3 产蛋减少综合征
  产蛋减少综合征 (EDS) 的主要特征是看似健康的鸡或鹌鹑出现产蛋急剧下降或者产畸形蛋。该病在1976年由荷兰学者Van Eck首先报道。之后, 世界各地其他国家和地区也相继报道了该病的发生。
  鸡群中最初爆发的疫情可能是跟鸭胚成纤维细胞制备的疫苗受到污染有关。此外, 同感染病毒的鸡生活在一起的鹌鹑也可以发生EDS, 导致产蛋下降、蛋壳变薄。尽管该病主要在蛋鸡或者鹌鹑中发生, 鸭子、鹅、环颈雉、珍珠鸡、鸽子以及野鸟中也能检测到病毒或抗体。2001年, EDSV对匈牙利的小鹅造成了严重的急性呼吸疾病。受影响的雏鹅在4~20等日龄之间, 主要症状包括厌食、精神沉郁、打喷嚏、咳嗽、呼吸困难、啰音等。克罗地亚报道一个农场的种火鸡群中发生了EDS, 症状是蛋的产量和质量明显下降。
  EDSV可以通过母鸡垂直传播给小鸡, 也可以在鸡与鸡之间水平传播。污染的鸡蛋、蛋托或粪便是病毒传播的主要来源。不过, 有些疫情的暴发被认为同接触野鸟或者含有野鸟粪便的污水有关。

人工感染试验显示, 母鸡感染病毒2~6d后可以从鼻腔表面上皮检测到核内包涵体。感染后的第2~5天期间, 全身淋巴组织中可以检测到较低水平的病毒抗原。感染后的第3~5天期间可以观察到炎症病变, 卵巢漏斗部可以检测到病毒抗原。感染后的第8天, 囊壳腺首次检测到病毒复制, 但病毒从未在消化道上皮细胞中被检测到。肉鸡种鸡和褐壳蛋鸡发病最为严重, 白壳蛋鸡发病较轻, 死亡率一般很低。

  垂直感染病毒的鸡直到性成熟仍能保持无临床症状的感染。发病时, 最早出现的现象是蛋壳与正常的相比更白、更薄, 接着出现产软壳蛋和少壳蛋的现象。鸡蛋形状不规则, 蛋壳表面粗糙。同正常鸡蛋相比, 少壳蛋蛋白较少, 软壳蛋呈水样粘稠状。通常, 过一段时间后, 鸡群会恢复到正常的产蛋量水平。疫情一般持续3~8周。尽管EDS的症状很明显, 但诊断不能仅基于临床表现, 需要实验室确诊。因为有多种传染性或非传染性的病原也可以导致产蛋下降, 降低鸡蛋质量。

  尽管EDS的症状很明显, 但诊断不能仅基于临床表现, 需要实验室确诊。因为有多种传染性或非传染性的病原也可以导致产蛋下降, 降低鸡蛋质量。此外, 一些非传染性的因素如饲养密度过高、饲料和饮水质量差等因素也可以引起产蛋下降。
  病理剖检没有特别的病变, 可以观察到卵巢和输卵管轻微萎缩。输卵管和子宫 (蛋壳腺) 可以观察到病理组织学变化, 如上皮细胞严重变性、脱落。子宫腺体萎缩, 异嗜性细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润。子宫、输卵管峡部、阴道等部位的上皮细胞可观察到细胞核内包涵体。
  4 腺病毒感染的诊断
  对于家禽疾病的诊断一般首先基于病史、临床症状和病理剖检。这是对疾病诊断的重要步骤, 但并不是最终的步骤。很多疾病在临床症状和病变方面比较相似, 需要实验室诊断最终确诊。实验室诊断的方法可以是采用分离病毒的方法直接检测病毒, 也可以采用间接地检测抗体法。以往, 对于家禽腺病毒感染, 大多数情况下, 采用病理组织学观察核内包涵体, 免疫荧光检测抗原或者电镜鉴定抗原的方法。随着分子生物学技术的发展, PCR、Real-time PCR以及REA等方法已被运用于检测病毒DNA以及进一步对病毒鉴定和分型。
  采用鸡胚肝细胞 (CEL) 以及鸡胚成纤维细胞培养的方法分离病毒用于进一步鉴定以及判定病毒的致病性相当重要, 因为同一血清型病毒的不同分离株, 其致病性差异很大。交叉中和实验以及分子生物学方法对分离到的病毒进行分型或者确定新的血清型十分重要。
  EDSV可以使用鸭胚、鹅胚或者细胞分离。易感细胞系包括鸭和鸡胚肝细胞, 鸭肾细胞核成纤维细胞。病毒可以直接从染病母鸡的生殖道中分离到。
  最常见的血清学检测方法是用免疫扩散试验检测特定的抗原, 但这种方法不够敏感。特异性的ELISA以及IF (免疫荧光) 实验更为敏感。血清中和试验可以用于检测血清特异性的抗体, 但耗时耗力, 花费也较多。对血清学实验结果的解释比较困难, 因为健康和患病的禽类都会存在针对AAV的抗体。
  此外, 采用鸡红细胞的血凝抑制实验也可以用于检测EDSV抗体。免疫胶体金技术检测EDSV抗体的方法也已经有报道。
  5 禽腺病毒感染的防控
  5.1 防控IBH/HPS
  良好的生物安全措施是防控感染首要也是最基本的措施。精心管理, 加强禽舍环境及其设备的清理和消毒、限制来访人员, 做好疫苗的免疫接种工作在防控中也起着重要作用。
  在具有高度感染压力的国家, 该病已经通过疫苗得到较好地控制。疫苗通常采用病禽的肝脏, 用福尔马林灭活后制备, 也有采用灭活的染毒细胞制备的。有研究比较了两种采用病禽肝脏组织制备的灭活疫苗。一种疫苗不使用佐剂, 另一种疫苗经氯仿提取福尔马林灭活后, 以石蜡作为佐剂。油乳剂疫苗对10日龄的鸡进行皮下免疫, 所提供的保护力达到了100%, 一直到7周龄。不用佐剂的灭活疫苗的效果则相对较差。事实上, 疫苗的实际效果, 不同的研究报道差异很大。影响疫苗效果的因素也有很多, 养禽场需要根据实际情况进行。用于防控鸡包涵体肝炎 (IBH) /心包积水综合征 (HPS) 的疫苗也已有很多报道。多数情况下, 鸡包涵体肝炎 (IBH) 是通过垂直传播引起的, 疫苗在防控垂直感染方面有较好的效果。因为疫苗可以诱导母源抗体的产生。有报道称, 对种禽先后免疫针对FAV-4和CAV的疫苗, 可以有效地防控子代发生IBH/HPS。30~50周龄肉鸡种鸡免疫针对FAV-8和FAV-11感染的疫苗也能够有效地保护子代。
  5.2 防控EDS
  除了良好的生物安全措施外, 在蛋鸡产蛋前使用灭活疫苗免疫对防止产蛋数量以及质量下降十分重要。疫苗接种应该在14~16周龄时开始, 不过疫苗并不能完全抑制病毒通过粪便排毒, 只能减少排毒量。


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